Выявления вредителей в скрытой форме зараженности.
Многие вредители зерна большую часть своей жизни проводят внутри зерновок, поэтому выявить плотность зараженности зерна в скрытой форме довольно сложно. К вредителям, заражающим зерно в скрытой форме, относятся: рисовый, амбарный и кукурузный долгоносик, зерновой точильщик, зерновая моль. Развитие долгоносиков полностью (от яйца до имаго) протекает внутри зерновки. Самки долгоносиков прогрызают в зерне отверстие, куда откладывают яйцо, и затем запечатывают отверстие секреторной жидкостью, которая затвердевает и образует пробочку. Самки эернового точильщика и зерновой моли откладывают яйца на поверхность субстрата, а вылупившиеся личинки и гусеницы I возраста вбуравливаются внутрь зерновки, где и завершают развитие до стадии имаго. Иногда таким же образом развиваются и некоторые виды мукоедов. Скрытую форму зараженности в своем онтогенезе дают также насекомые - вредители семян бобовых культур: гороховая, фасолевая, бобовая, чечевичная и другие зерновки.
Обычным просеиванием на ситах скрытую форму зараженности зерна определить невозможно. Для ее выявления используют другие более сложные методы. Основные требования, которым должен удовлетворять метоп определения скрытой зараженности зерна, можно сформулировать следующим образом. Метод должен быть объективным, удобным экспрессным, точным и чувствительным. Он должен давать возможность определять не только факт заражения, но и размер заражения, вид и стадию развития вредителя, а также отличать живых насекомых от мертвых. Метод должен быть механизированным и экономичным Существующие в настоящее время методы определения скрытой формы зараженности зерна не отвечают всем вышеперечисленным требованиям. Каждый из них имеет свои преимущества и недостатки.
Нередко в зерновках в скрытой форме находится во много раз больше насекомых, чем их обитает в межзерновом пространстве. По данным наблюдениям, на одного жука рисового долгоносика в межзерновом пространстве в среднем приходится около 80 особей (включая яйца, личинки, куколки и имаго), живущих внутри зерновок. По другим данным, на каждое зерно пшеницы с выходным отверстием долгоносика приходится пять зерен со скрытой зараженностью. Исходя из этого можно с достаточной степенью приближения определить плотность скрытой зараженности по количеству жуков в межзерновом пространстве или по числу зерен, из которых отродились долгоносики. По мере развития насекомых внутри зерновки последние становятся несколько более темными и мягкими, и для опытного работника такое состояние заметно сразу. Внешним признаком скрытой зараженности зерна вредителями могут служить паутина, экскременты.
Наблюдение за отрождением насекомых.
Это самый точный метод определения скрытой зараженности зерна. Он позволяет выявить видовой состав вредителей и их количество в объединенной пробе зерна. Однако метод очень длителен и может быть применен как арбитражный. Часто им пользуются в экспериментах. Заключается метод в том, что пробы зерна, из которых предварительно удалили насекомых, находящихся в межзерновом пространстве, помещают в термостаты при оптимальных условиях, чаще всего при 27 °С. Через четыре недели, а затем спустя еще две недели пробы зерна просеивают и определяют количество насекомых.
Раскалывание зерен.
От объединенной пробы зерна отсчитывают без выбора 50 целых зерен основной культуры и раскалывают их скальпелем или препаровальной иглой вдоль бороздки. Расколотые зерна просматривают под лупой для выявления личинок, куколок или жуков. Зерна с наличием вредителей подсчитывают и выражают в процентах к количеству взятых зерен. Метод позволяет обнаружить внутри зерна любых вредителей и распознать их принадлежность к тому или иному виду, а также живые они или мертвые. Однако метод трудоемок.
Окрашивание входных отверстий насекомых.
Скрытую форму зараженности определяют методом, основанным на окрашивании пробочек, которыми самка жука заделывает углубления в зерновке по месту кладки яйца. Для обнаружения пробочек из средней пробы зерна выделяют навеску в 15 г, очищают ее от сорняков и зерновой примеси, битых и изъеденных зерен и высыпают на чистую сетку в жестяной оправе. Сетку с зерном погружают на 1 мин. в чашку с водой (температура 30°С) для разбухания пробочек. Затем переносят ее на 20 - 30 сек. в свежеприготовленный 1%-ный раствор перманганата калия и на 20 - 30 сек. в раствор серной кислоты с перекисью водорода. На 100 мл 1%-ного раствора серной кислоты берут 1 мл 3%-ной перекиси водорода. Пробочки окрашиваются в черный цвет и резко выделяются на поверхности зерна. Размер пробочек не превышает 0,5 мм. Окрашенные округлые пятна могут появиться на зерне также в местах, просверленных долгоносиком во время питания, но яйца туда не отложены. Пятна такого происхождения имеют интенсивно окрашенные края, светлую середину и подсчету не подлежат. Скрытую зараженность долгоносиком пересчитывают на 1 кг зерна. Мертвых вредителей относят к сорной примеси и при определении зараженности не учитывают. В документах, характеризующих качество зерна, обязательно отмечают показатель зараженности.
Акустический метод
Принцип акустического метода определения зараженности зерна состоит в том, что шум, производимый насекомыми, воспринимается чувствительным датчиком и преобразуется в электрический сигнал. После усиления в несколько тысяч раз сигнал подается на динамик (или головные телефоны) и на стрелочный индикатор. Присутствие насекомых в зерне обнаруживается по характерному шуму или по отклонению стрелки индикатора. Результаты обработки спектрограмм показали, что наибольшая энергия акустического шума насекомых сосредоточена в области частоты около 1...1,5 кГц.
Гальванометрия.
Метод регистрации скрытой зараженности зерна насекомыми, в основу которого положен гальванометрический принцип. Если между двумя электродами, имеющими различные стандартные электродные потенциалы (например, медь и цинк), механически разрушить зерновку, то полостная жидкость насекомого замкнет электрическую цепь и обусловит генерирование электрохимической электродвижущей силы. На фазовых границах электроды — электролит (роль которого выполняет полостная жидкость) происходят электрохимические реакции, энергия которых служит источником тока, протекающим во внешней цепи. Регистрация этого тока прибором непосредственно с электродов, которыми разрушается зерновка, позволяет судить о присутствии внутри зерновки насекомого.
Флотационные методы.
Если пробу зерна пшеницы или семян гороха погрузить в водный раствор глицерина (плотность 1,15 и 1,25 соответственно) и перемешать для удаления пузырьков воздуха с поверхности зерна, то незараженные зерна, а также часть зерен с яйцами и молодыми личинками опустятся на дно, а зерна с личинками среднего возраста и более взрослыми насекомыми останутся на поверхности раствора. Эти зерна можно собрать, расколоть и убедиться в присутствии вредителей. Этот метод флотации прост и дешев, но он не позволяет точно определить плотность заражения.
Другой флотационный метод состоит в грубом размоле зерна в шаровой мельнице, чтобы освободить насекомых и их частицы. Этот материал отделяют от шрота в растворе спирта и затем исследуют под микроскопом.
Метод замера углекислого газа.
Присутствие насекомых внутри зерна можно определить также по повышению концентрации углекислого газа в межзерновом пространстве при содержании пробы зерна в герметичном сосуде. Если за 4 ч концентрация углекислого газа повысится до 1%, то плотность заражения составляет приблизительно 55 личинок в 1 кг зерна.
Метод измерения мочевой кислоты.
Зараженность зерна насекомыми можно установить измерением содержания в пробе зерна мочевой кислоты — обязательной составной части экскрементов насекомых.